柱式動物組織/ 細(xì)胞總蛋白抽提試劑盒

產(chǎn)品描述

本試劑盒創(chuàng)新性地采用過柱純化的方法，能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細(xì)胞，有效提取總蛋白，包括離心管柱和經(jīng)過優(yōu)化的細(xì)胞裂解液。與傳統(tǒng)的RIPA裂解液相比，本試劑盒可以提取出更多的蛋白，避免在細(xì)胞裂解過程中由于DNA沉淀和不溶性細(xì)胞碎片導(dǎo)致的部分蛋白丟失。采用過柱純化技術(shù)，最小可處理20 μL樣本與裂解液混合物，最大可達(dá)500 μL。提供變性和非變性兩種細(xì)胞裂解液，用戶可根據(jù)后續(xù)的實驗需求選取不同的裂解液。

【注】：變性裂解液可用于SDS-PAGE，Western-blotting， ELISA 分析；非變性裂解液可用于IP，Co-IP，enzyme assays 等分析。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存

常溫運輸。組分A、B在4℃保存，組分C、D常溫保存，有效期12個月。【注】：研磨棒可重復(fù)使用。低溫下變性裂解液會出現(xiàn)成分析出，緩至室溫或水浴鍋溫浴即可。

使用方法

細(xì)胞樣品

一、 樣品裂解

變性液提取

1.       去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過少會使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。

2.       用槍吹打數(shù)下，轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。【注】：少量沒有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min。

4.       收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.       去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過少會使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。

2.       用槍吹打數(shù)下，冰上放置10min后轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min。

4.       收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

二、懸浮細(xì)胞

變性液提取

1.         收集細(xì)胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL離心管中，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min，棄上清，重復(fù)三次。

2.         根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞后，根據(jù)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的變性裂解液。【注】：表中為推薦用量；PBS不可多加，只要能使細(xì)胞重懸即可。

3.         劇烈震蕩15s后，轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。【注】：少量沒有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。                   

4.         14,000 rpm 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）。

5.         收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.         收集細(xì)胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL離心管中，1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次，1,000xg 離心 3min ，棄上清，重復(fù)三次。

2.         根據(jù)細(xì)胞量加入對應(yīng)量的非變性裂解液。【注】：表中為推薦用量。

3.         劇烈震蕩15s后，冰上孵育10min。

4.         轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rpm 室溫離心1min

6.         收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

三、組織樣品

變性液提取

1.         把組織剪切成小碎片。

2.         加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1mL 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。

3.         用組織勻漿器或研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織，直至充分裂解。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。

4.         轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）。

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。

非變性液提取

1.         組織剪切成小碎片。

2.         加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1ml 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。

3.         用組織勻漿器或研磨棒研磨組織，直至充分裂解。冰上放置10min。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。

4.         轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min。

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.    本產(chǎn)品不含蛋白酶抑制劑，使用中應(yīng)加入蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號: AP02L084) 防止蛋白降解。

3.    本產(chǎn)品不兼容Bradford法測蛋白濃度，請使用 BCA蛋白定量試劑盒（貨號： AP12L025）。

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